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準(zhǔn)備工作

設(shè)備校準(zhǔn)：在開始測序之前，需要對基因測序儀進行校準(zhǔn)，確保其性能符合標(biāo)準(zhǔn)。

樣本準(zhǔn)備：

ＤＮＡ提取：從生物樣本（如血液、組織等）中提取ＤＮＡ。

文庫構(gòu)建：將提取的ＤＮＡ打斷成小片段，然后進行末端修復(fù)、加Ａ尾、接頭連接等步驟，構(gòu)建成適合測序的文庫。

樣本質(zhì)量控制：對構(gòu)建好的文庫進行定量和質(zhì)控，確保文庫的質(zhì)量。

測序步驟

上機測序：

將合格的文庫樣本添加到測序反應(yīng)體系中。

將反應(yīng)體系加載到測序儀的樣本板（或芯片）上。

測序反應(yīng)：

ＰＣＲ擴增：對文庫樣本進行ＰＣＲ擴增，以增加目標(biāo)區(qū)域的ＤＮＡ量。

測序：測序儀會逐個讀取ＤＮＡ片段的序列信息。

測序儀會按照預(yù)定的測序流程進行反應(yīng)，通常包括以下步驟：

數(shù)據(jù)收集：

測序儀會將測序結(jié)果以圖像或數(shù)據(jù)流的形式輸出。

數(shù)據(jù)分析：

質(zhì)量控制：去除低質(zhì)量序列。

序列拼接：將測序得到的短讀段拼接成長序列。

比對：將拼接后的序列與參考基因組比對，確定變異位點。

變異注釋：對檢測到的變異進行功能注釋。

將測序數(shù)據(jù)導(dǎo)入生物信息學(xué)軟件進行分析，包括：

后續(xù)操作

結(jié)果解讀：根據(jù)數(shù)據(jù)分析結(jié)果，解讀測序數(shù)據(jù)，得出生物學(xué)結(jié)論。

報告生成：將分析結(jié)果整理成報告，供臨床或研究使用。

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